تولید بز تراریخته حامل ژن بیان کننده فاکتورix انعقادی خون انسان با قابلیت ترشح در شیر به وسیله تکنیک انتقال هسته

تعداد بی شماری از پروتئین های نوترکیب وجود دارند که در شیر بیان می شوند. در این راستا می توان ژن مورد نظر را به منظور بیان در شیر یک حیوان مزرعه ای تحت کنترل عناصر تنظیمی قرار داد. انتقال هسته با استفاده از سلولهای ترانسفکت شده، ابزار کارآیی برای تولید حیوانات تراریخته است. در این مطالعه به منظور تولید بز تراریخته با توانایی ترشح فاکتور ix انعقادی انسانی نوترکیب (rhcfix) در شیر، سازه ژنی(pbc1-hfix) با قرارگیری cdna ژن مذکور بعد از پروموتور بتا- کازئین ساخته شد. سپس سلولهای فیبروبلاست جنینی بز توسط pbc1-hfix ترانسفکت شدند. سلولهای فیبروبلاست از جنینهای 35 تا 40 روزه بز تهیه گردید. سپس کلونهای مثبت (سلولهای فیبروبلاست حاوی سازه ژنی) انتخاب شده و توسط pcr تأیید شدند. به سلولهای فیبروبلاست جنینی ترانسفکت شده اجازه داده شد که پس از رسیدن به مرحله تراکم سلولی، به مدت 72 ساعت در همان محیط dmem حاوی 15 در صد سرم کشت شده تا در مرحله g0/g1 سیکل سلولی هم زمان شوند. تخمکهای نابالغ از تخمدان های کشتارگاهی به دست آمدند و قبل از بی هسته سازی و انتقال هسته بالغ شدند. تخمکهای بازسازی شده با سلولهای دهنده، فیوژشده و فعال سازی آنها با استفاده از یونومایسین و 6dmap انجام شد. جنینهای بازسازی شده به پذیرنده های هم زمان شده منتقل شدند. 64 جنین حاصل از سلولهای فیبروبلاست جنینی ترانسفکت شده به 12پذیرنده انتقال یافتند. در دو مورد از پذیرنده ها (16.6 درصد) بارداری در روز 42 توسط سونوگرافی تأیید شد. یکی از بارداریها منجر به تولد دو بزغاله سالم گردید. حضور ژن فاکتور ix انعقادی انسانی در بزغاله ها با استفاده از واکنش pcr وsequencing تأیید گردید. این نتایج نشان می دهد که سلولهای فیبروبلاست جنینی بز حاوی ژن فاکتور ix می توانند تکوین طبیعی جنین را پس از انتقال هسته تا مرحله ترم پیش برند. این اولین تولد زنده حیوان تراریخته در ایران است.